2016年1月28日星期四

簡單介紹何為顯微鏡的解像力

  簡單介紹何為顯微鏡的解像力   一般使金相顯微鏡用顯微鏡有三個目的:   <1>放大觀察物體的影像   <2>達到顯微鏡最大觀察清晰度   放大鏡<3>望遠鏡提供足天文望遠鏡夠的對比   顯微鏡的解像力   即為顯微鏡下能判別出兩點的最小距離,   若一顯微鏡的解像力值為0。3μm即表示兩點距離若大於0。3μm   則在顯微鏡下即可分辨出兩點   若是小於0。3μm則將會視為一點

顯微鏡注意事項

  1。 嚴忌單手提取顯微鏡。   2。 若須移動顯天文望遠鏡微鏡,務必將顯微鏡提起再放至適當位置,嚴忌推動顯微鏡   (推動時造成的震動可能會導致顯微鏡內部零件的松動,切記!!),使用顯微鏡請務必小心輕放。   3。 使用顯微鏡時坐椅的高度應適當,觀察時更應習慣兩眼同時觀察,且光圈及光源亮度皆應適當,否則長時間觀察時極易感覺疲勞。   4。 轉動旋轉盤時務必將載物台降至最低點,以免因操作不當而刮傷接目鏡之鏡頭。   5。 標本染色或其他任何操作皆應將玻片取下,操作完成後再放回載物台重新對焦觀察,切勿在載物台上操作,以免染劑或其他液體流入顯微鏡內部或傷及鏡頭。   6。 觀察完一種材料,欲更換另一種材料時,務必將載物台下降至最低點,換好玻片後再依標准程序重新對焦,切勿直接抽換標本,以免刮傷鏡頭或玻片標本。   7。 顯微鏡使用前後皆應以拭鏡紙(lens paper)及95% Alcohol清潔所有鏡頭,擦拭時應沿單一直線方向輕拭,不可旋轉磨擦。  顯微鏡 8。 擦拭顯微鏡鏡頭時只能用拭鏡放大鏡紙,切勿用其他紙張或手指接觸鏡頭。   9望遠鏡。 用畢顯微鏡應將載物台下降至最低點,並將低倍鏡對准載物台中央圓孔處,將電源線卷好金相顯微鏡,蓋上防塵罩,並收入存放櫃中。   10。 若長期不使用,應以Xylene (Xylol) 清潔所有鏡頭。

偏光顯微鏡的調節與校正



偏光顯微鏡的調節與校正時,第一步望遠鏡要先對目鏡和物鏡進行調節。對於只有一個目鏡筒的偏光顯微鏡,只要將選用的目鏡插入鏡筒,使目鏡十字絲位於左右、上下方向即可。對於具有雙目鏡筒的偏光顯微鏡,還需調節兩個目鏡之間的距離,使眼睛間距與雙筒視線一致。因顯微鏡類型不同,物鏡的裝顯微鏡卸有下列幾種情況:彈簧夾型、轉盤型、螺絲扣型。
第二步,調節照明系統。分以下兩種情況:1)有自然光照明,則需要調節反光鏡。反光鏡有平面鏡和凹面鏡兩種。2)用人工光源照明,如OLYMPUS和ZEISS等高級顯微鏡都用人工光源照明,需要調節電壓旋鈕,電壓越高,亮度越大。
第三步,調節焦距。調焦時,需從側面看鏡筒,轉動粗調旋鈕,將鏡頭降至最低位置,若用高倍鏡頭,需將鏡頭降至幾乎與薄片接觸為止,然後從鏡放大鏡中觀測,同時轉動粗旋鈕緩緩提天文望遠鏡升鏡頭至視域內物像基本清楚,在轉動微調旋鈕,直至視域內物像清晰為止。須注意的是,調焦時,絕不能金相顯微鏡眼睛看著鏡筒內下降鏡筒,這樣容易壓壞薄片。特別是中高倍鏡的調焦要小心物鏡壓碎薄片。

光學顯微鏡和電子顯微鏡的優缺點



隨著科學技術的快速發展,電子顯微鏡在顯微領域的應用放大鏡前景甚是廣闊,較光學顯微鏡表現出了它獨到的優越性。但是因為光學顯微鏡和電子顯微鏡的應用的技術和領域各不相同,電子顯微鏡又不能完全替代光學顯微鏡。
在生物學中的應用來說,光學顯微鏡顯微鏡的分辨本領遠遠不如電子顯微鏡,因為光學顯微鏡的分辨率受衍射極限的限制,所以它的分辨率不可能小於入射光波長的一半。也就是說,如果用400nm的入射光,那麼觀察對像不能小於200nm。但是由於其可以進行實時、望遠鏡動態觀察,在生物學中的地位是無可比擬的,就想在生物學領域中不可能離開熒光顯微鏡和共聚焦天文望遠鏡之類的光學顯微鏡。而電子顯微鏡由於使用電子束來掃描成像,其分辨率可以很輕松的達到納米級,這對於高分辨率成像的應用時不可取代的。
在金相分析學中的應用來說,電子顯金相顯微鏡微鏡的放大倍率也遠遠超過光學顯微鏡,現代電子顯微鏡的最大放大倍率已經超過300萬倍,而光學顯微鏡的最大放大倍率約為2000倍,所以電子顯微鏡能夠直接觀察到某些重金屬的原子和晶體中排列整齊的原子點陣。
雖然電子顯微鏡的分辨本領和放大能力遠勝於光學顯微鏡,但是它也存在一些缺點:
1)電子顯微鏡中樣本必須在真空中觀察,因此無法觀察活樣本。隨著技術的進步,掃描電鏡將逐漸實現直接對活樣本的觀察。在處理樣本時可能會產生樣本本來沒有的結構,這加劇了伺候分析圖像的難度。由於投射電鏡只能觀察非常薄的樣本,而有可能物質表面的結構不同。此外電子束可能通過碰撞和加熱破壞樣本;
2)電子顯微鏡的樣品缺乏有效地tag(如光學顯微鏡中的GFP);
3)電子顯微鏡的購買和維護的價格都是比較高的。

微型顯微鏡助醫生在手術中識別癌細胞


 在切除惡性腦腫瘤時,醫生既不想留下任何癌細胞,又要保護健康顯微鏡腦組織,將對神經的傷害盡可能降到最低。然而一旦打開了病人顱骨,就沒時間在笨重的顯微鏡下對組織樣本進行病理分析。據美國華盛頓大學最新消息,該校工程師與斯坦福大學紀念斯隆•凱特琳癌症中心、巴羅神經學研究所合作,開發出一種手持式微型顯微鏡,讓醫生在手術時也能看到細胞水平,幫他們決定該在哪裡果斷下刀,在哪裡刀下留情。

  新的手持顯微鏡比鋼筆略大一點,用了一種叫做“雙軸共焦顯微技術”的新方法,能更清晰地“看透”不透明組織,捕獲組織表層以下半毫米的細節。研究人員之一、華盛頓大學機械工程副教授喬納森•劉說:“要看放大鏡到組織表面以下,就像開著燈在濃霧中駕駛,無法看得太遠。但我們用的(顯微鏡)就像霧光燈,從不同的角度照亮並減少炫光,能在濃霧中看得更遠。”

  要讓顯微鏡更小,通常要犧牲圖像質量或分辨率、視域、深度、對比度、處理速度等性能。研究人員結合了快速高望遠鏡質量圖像的處理傳輸技術,實現了各種圖像指標的平衡。他們發表在《生物醫學光學快報》上的論文稱,微型顯微鏡的分辨率足以看到亞細胞水平,其拍攝的小鼠組織圖像能和在臨床病理實驗室經過多天處理後的圖像媲美。

  喬納森•劉表示,手術中要知道切除的究竟是不是腫瘤,外科醫生只能用眼天文望遠鏡睛看,憑借觸覺和金相顯微鏡術前腦成像,有時會相當主觀。如果能在手術過程中放大組織,看到細胞水平,有助於他們精確區分腫瘤和正常組織,會讓手術效果更好。

  研究人員希望將微型顯微鏡作為一種臨床癌症篩查工具,他們將在2017年對其進行測試,然後在2到4年裡將其用於手術或其他臨床程序。

2016年1月19日星期二

顯微鏡油鏡的使用



  由於細菌體積微小,故在細菌的形態學研究中,經常需要金相顯微鏡借助顯微鏡油鏡,才能比較清楚地進行觀察。因此,同學們必須熟練地掌握油鏡的使用及保護法。

  (一)油鏡頭的識別:

  各接物鏡的放大率可由其外形辨認,鏡頭長度越大,鏡片直徑越小,放大倍數大;反之,放大倍數小。油鏡頭長度大於低、高倍鏡,鏡頭下緣一般刻有顯微鏡一圈黑線或白線,並刻有100×、1。25或oil等字樣。

  (二)油鏡的使用法:

  1、使用XSP-9CP顯微鏡油鏡時,必須將顯微鏡端正直立桌上,不得將鏡臂彎曲,使載物台傾斜,以免香柏油流溢,影響觀察,污染台面。

  2、對光:

  采用天然光為光源時,宜用平面反光鏡;若用人工燈光時,則用凹面鏡。

  首先打開光圈,轉動反光鏡,使光線集中於集光器。可根據需要,上下移動集光器和縮放光圈,以獲得最佳光度。

  一般用低倍鏡或高倍鏡觀察物像或用油鏡檢查不染色標本時,需下降集光器並適當地縮小光圈,使光度減弱;若用油鏡檢查染色標本時,光度宜強。應將顯微鏡亮度開關調至最亮,光圈完全打開,集光器上升至與載物台相平。

  3、調焦距:

  A、將標本片放載物台上,用標本推進器固定,將欲檢部分移至接物鏡下。先用低倍鏡找出標本的位置,然後提高鏡筒,在標本的待檢部位滴鏡油一滴,再換油鏡觀察。

  B、轉動粗調節器使載物台徐徐上升(或使鏡筒漸漸下降),直至油鏡頭浸沒至油中。此時眼睛應從側面觀察,以免壓碎標本片和損壞鏡頭。

  C、然後雙眼移至接目鏡,一面從接目鏡觀察,一面反方向緩慢地轉動粗調節器(下降載物台,或上升鏡筒),當出現模糊物像時,換用細調節器,轉動至物像清晰為止

  D、觀察完畢,應先提高鏡筒,並將油鏡頭扭向一側,再取下標本片。油鏡頭使用後,應立即用擦鏡紙擦淨鏡頭上的油。若鏡油粘稠干結於鏡頭上,可用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦拭鏡頭,並隨即用干的鏡紙擦去殘存的二甲苯,以免二甲苯滲入,溶解用以粘固透鏡的膠質物,造成鏡片移位或脫落。

  (三)油鏡的使用原理:

  油鏡的透鏡很小,光線通過玻片與油鏡頭之放大鏡間的空氣時,因介質密度不同,發生折射或全反射,使射入透鏡的光線減少,物像顯現不清。若在油鏡與載玻片之間加入和望遠鏡玻璃折射率(n=1。52)相近的香柏油(n=1。515),則使進入透鏡的光線增多,視野亮度增強,使物像明亮清晰。

  (四)顯微鏡的維護:

  1、上海光密顯微鏡是精密儀器,使用時要注意愛護,切勿隨意拆卸和碰撞。

  2、強酸、強堿、氯仿、酒精、乙醚等都能天文望遠鏡去漆或損壞機件,均需注意不使接觸顯微鏡。

  3、細調節器是顯微鏡最精細、最脆弱的機械部分,每旋轉一周使鏡筒上升或下降0。1毫米,只能往返回轉,即向一個方向轉動數周遇阻力時,應反方向轉動。

  4、不用時將接物鏡轉成“八”字形,載物台降至低點,下降集光器,關上光圈,套上保護罩,雙手平托送回。


顯微鏡的正確調試和使用



  ① 首先將燈室的外殼打開,壓彈簧夾子將鹵素燈泡裝入天文望遠鏡插座中,安裝時避免手指直接接觸燈泡(可用柔軟的布或紙隔住),以免燈泡上留有指紋等髒物,影響燈泡的使用壽命。

  ② 把燈室擺在桌面上,接通電源後,用專用的螺絲刀調節燈的調焦旋鈕孔(標有“←→”),使燈絲投影在1-2m外的牆上,將燈絲成像調至清晰;然後調節燈的高低位置調節絲孔(標有“──”),使燈絲位置高低適當;再調節燈的左右位置調節螺絲孔(標有“──”),使燈絲左右位置合適。

  (2) 光源發光體(燈絲)在顯微鏡內位置的檢驗和校正 目的是為了把發光體的像端端正正地調入物鏡的視域範圍內,從光源的角度去確保顯微鏡的視域受到充分而均勻的照明,這是調整庫勒照明系統的前提條件。

  需要的基本工具:對中望遠鏡購置顯微鏡時已配備。

  ① 拔掉燈庫內的毛玻璃套筒,顯微鏡把燈室裝回顯微鏡上;

  ② 選用10×物鏡,開亮光源程序找樣品並調焦清晰,再換用40×物鏡把樣品調焦清

  晰(40×物鏡可以看清燈絲的全貌);

  ③ 把聚光鏡的孔徑光闌和視場光闌均開到最大;

  ④ 拔掉其中一個目放大鏡鏡,換上對中望遠鏡,抓住白色部分,另一手伸縮黑色接目鏡,就可在視野中看到燈絲像;

  ⑤ 如望遠鏡燈絲位置不合適,調“──”孔,把燈絲像沿水平方向調好,調“──”孔,把絲像沿垂直方向調好,直至將燈絲像調至剛好充滿物鏡孔徑的光圓像;

  ⑥ 調整完畢後,將毛玻璃套筒插回原位,拔掉對中望遠鏡,換回目鏡作下一步調整。

  以上所述照明光源燈室在顯微鏡外的調整和光源發光體在顯微鏡內位置的校驗,只需在顯微鏡初次安裝調試及更換燈泡時進行,平時使用顯微鏡時不能隨意亂調亂動。萬一調亂時,可按上述步驟調回原狀。

  (3) 庫勒照明(Kohler)系統的正確調整 顯微鏡的正確調試,主要工作之一是照明光路系統的調整,而其中的關鍵是庫勒照明系統的調整。對於每一位使用顯微鏡的人員,特別是作顯微照相的人員來說,應該對庫勒照明系統的原理及其調整步驟有一定的了解和掌握,才能充分發揮顯微鏡應有的功能,拍出來的照片才金相顯微鏡能在效果上比較一致而又完善。